大菌落腦膜炎奈瑟菌多群診斷血清

廣州健侖生物科技有限公司

【儲藏條件】

2~8℃避光保存，在標明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個月

【產(chǎn)品名稱】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個常見血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應(yīng)血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價高，特異性強的特點。

大菌落腦膜炎奈瑟菌多群診斷血清

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復(fù)溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進行血清分群檢測，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

3.待鑒定細菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個方格。

6. 在玻片每個方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過夜培養(yǎng)的細菌菌落。

8. 在玻片上將細菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清群的血清會相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。

【凝集反應(yīng)的強度等級】

當抗血清與細菌接觸，會引起凝集反應(yīng)，使細胞（細菌）凝集或呈簇，細胞（細菌）上清液變得清亮，細胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強度的凝集反應(yīng)，見圖示

4+ 所有的細胞都發(fā)生凝集，細胞懸液清亮。

3+ 75%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。

0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽性反應(yīng)（強陽性反應(yīng)）。對于B群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認為陽性。

2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強反應(yīng)，都應(yīng)標記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無莢膜，小菌落與大菌落，慢生長與快生長，強凝集與弱凝集），有時候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個細菌克隆進行重復(fù)凝集試驗。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復(fù)該試驗。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細菌進行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進行重新試驗。

5. 如果當天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進行試驗。大菌落一般會有比較好的凝集反應(yīng)，小菌落次之。

6. 如果試驗中的問題還是不能解決，應(yīng)當和對照菌株同時進行試驗，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對未知的菌落進行血清分群之前，應(yīng)選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進行質(zhì)量控制檢測。操作步驟：

1. 新購進的每一批次抗血清要用參考菌株進行檢測。

2. 半年后重復(fù)質(zhì)量控制檢測

3. 如果血清管暴露于超過4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時，也要對血清進行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進行實驗室驗證，記錄質(zhì)量控制驗證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測結(jié)果判讀】

1. 通過質(zhì)量控制檢測

與同源性的抗原反應(yīng)，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應(yīng)，不與NG菌株凝集反應(yīng)，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應(yīng)，或/和NG參考菌株反應(yīng)，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學(xué)、生化方法和血清學(xué)方法共同進行。

 2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免冷凍。反復(fù)凍融會使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過程中可能會產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

廣州健侖生物公司提供SSI血清產(chǎn)品，包括沙門氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，肺炎鏈球菌，嗜血桿菌等。并且提供德國有名血清品牌SiFin的核心血清產(chǎn)品，德國SiFin血清質(zhì)量好，實驗*，已被各高校實驗室，研究所列為推薦血清產(chǎn)品！詳情可咨詢工作人員！

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病原學(xué)檢查
本菌屬初次分離培養(yǎng)時多呈小球桿狀，毒力菌株有菲薄的微莢膜

，經(jīng)傳代培養(yǎng)漸呈桿狀，革蘭氏染細菌陰性。
本菌為嚴格需氧菌。牛布氏桿菌在初次分離時，需在5～10%CO2環(huán)

境中才能生長，zui適溫度37℃，zui適的pH6.6～7.1,營養(yǎng)要求高

，生長時需硫胺素，煙草酸和生物素，泛酸鈣等，實驗室常用肝

浸液培養(yǎng)基或改良厚氏培養(yǎng)基。此菌生緩慢，培養(yǎng)48小時后才出

現(xiàn)透明的小菌落，雞胚培養(yǎng)也能生長。
在自然界中抵抗力較強，在病畜的臟器和分泌物中，一般能存活4

個月左右，在食品中約能生存2個月。對低溫的抵抗力也強，對熱

和消毒劑抵抗力弱。對鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素等均敏感。
布氏桿菌具有二種抗原成份：A（牛布氏桿菌主要抗原成份）和M

（羊布氏桿菌主要抗原成份）。二種抗原在各種菌中含量不同，

牛布氏桿菌（Am）含a 抗原多，含M抗原少。羊布氏桿菌(aM)含M

抗原多，而含A抗原少。可利用凝集吸收試驗制備出單因子血清～

～單價A或M血清，供菌種鑒定之用。
1976年美國費城退伍軍人協(xié)會會員中曾爆發(fā)急性發(fā)熱性呼吸道疾

病，經(jīng)
研究，發(fā)現(xiàn)一種細菌命名為嗜肺軍團菌。隨后，許多有關(guān)細菌暫

被列入這一屬，且追溯研究發(fā)現(xiàn)早在1943年即有軍團人員病的病

例。現(xiàn)已提出了超過30種軍團桿菌，至少19種是人類肺炎的病原

。其中zui常見病原體為嗜肺軍團菌(占病例的85%~90%)，其次是L

。micdadei(占5%~10%)，再次是L。bozemanii和L。dumoffii。

此類細菌形態(tài)相似，具有共同的生化特征，引起類似疾病。[1] 
冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團菌特征描述
嗜肺軍團菌不抗酸，無孢子，無莢膜，類似于桿菌。不能分解明

膠、糖類或
是尿素，同時，不可參加酵解反應(yīng)。嗜肺軍團菌無細菌，也非自

身熒光。氧化酶與*酶測試陽性。β-內(nèi)酰胺酶陽性。
Etiological examination
The genus was isolated and cultured for the first time mostly small clubs, virulent strains have a meager micro-capsule

, Subculture gradually rod-shaped, Gram stain bacteria negative.
The bacteria for strict aerobic bacteria. Bovine brucellosis in the first separation, the need for 5 ~ 10% CO2 ring

The environment can grow, the optimum temperature of 37 ℃, the most suitable pH6.6 ~ 7.1, high nutritional requirements

, Need to grow thiamine, tobacco acid and biotin, calcium pantothenate, laboratory commonly used liver

Immersion medium or modified thick medium. This bacteria slow, cultured only 48 hours before

Now transparent small colonies, chicken embryo culture can grow.
Strong resistance in nature, in organs and secretions of sick animals, generally survive 4

About a month, about 2 months in food can survive. Resistance to low temperature is also strong, hot

And disinfectant resistance is weak. Streptomycin, chloramphenicol and tetracycline are sensitive.
Brucella has two antigenic components: A (the main antigen component of brucellosis) and M.

(Sheep brucellosis major antigen component). Two kinds of antigens in different bacteria content,

Bovine brucellosis (Am) contains more than a antigen, with less M antigen. Bovine brucellosis (aM) contains M

Antigens, and less with A antigen. Coagulation absorption test can be used to prepare single factor serum ~

~ Monovalent A or M serum, for identification of bacteria used.
In 1976, members of the Philadelphia Veterans Association of the United States had had an outbreak of acute febrile respiratory disease

Sick, after
Study and found a bacterium named Legionella pneumophila. After that, much about bacteria temporarily

Was included in this genus, and retrospective study found that as early as 1943 there are Legionnaires sick disease

example. More than 30 species of Legionella have been proposed and at least 19 are pathogenic to human pneumonia

. Legionella pneumophila is the most common pathogen (85% -90% of cases), followed by L

. micdadei (5% ~ 10%), again L. bozemanii and L. dumoffii.

Such bacteria are morphologically similar, have common biochemical characteristics and cause similar diseases. [1] 
Characteristics of Legionella pneumophila in cooling water and condensate
Legionella pneumophila not acid, no spores, no capsule, similar to bacilli. Can not be decomposed

Gum, sugar or
Is urea, at the same time, can not participate in the glycolysis reaction. Legionella pneumophila bacteria, nor from self

Body fluorescence. Oxidase and catalase test positive. β-lactamase-positive.