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技術(shù)文章
如何使用疫病核酸試劑進(jìn)行檢測(cè)點(diǎn)擊次數(shù)：1450 更新時(shí)間：2020-06-28
疫病核酸試劑檢測(cè)具體流程如下：
1、核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動(dòng)化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說(shuō)明書(shū)操作。提取RNA時(shí)應(yīng)注意防止RNA降解。DNA應(yīng)置于-20℃保存，RNA和需長(zhǎng)期保存的DNA應(yīng)置于-80℃保存。
2、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶yizhi劑、DTT、緩沖液和適量無(wú)RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴(kuò)增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第yi輪擴(kuò)增反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶yi制劑、DTT、緩沖液和適量無(wú)RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴(kuò)增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第yi輪擴(kuò)增反應(yīng)。
3、PCR擴(kuò)增反應(yīng)（使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法）
PCR反應(yīng)需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無(wú)RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴(kuò)增儀中，按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴(kuò)增。使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法。
4、擴(kuò)增產(chǎn)物定性分析
擴(kuò)增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較，判斷擴(kuò)增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有限制性?xún)?nèi)切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動(dòng)化核酸擴(kuò)增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測(cè)定。
5、結(jié)果判定和完成報(bào)告單
廣州健侖生物科技有限公司(www.baidipv.com) 熱門(mén)產(chǎn)品:喹諾酮類(lèi)檢測(cè)試劑盒,西尼羅河檢測(cè)試劑,基孔肯雅熱試劑,寨卡檢測(cè)試劑,疫病核酸試劑
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